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肥大细胞瘤kit免疫组化检测

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序言

在宠物犬的多发病中,皮肤肿瘤不能忽视,而其中约占犬皮肤肿瘤的20%的肥大细胞瘤(mast cell tumor,MCT)更应值得关注。由于占位常常不明显,故容易被忽视或者误诊。在常规肥大细胞瘤病理诊断中,5%-10%的病例单靠HE染色难以作出明确的形态学诊断。尤其在低分化或未分化肿瘤的鉴别诊断时,运用免疫组化的准确率可达50%-75%。文章就一例典型的 MTC的组织病理学的诊断进行了总结,以期能增加宠物医师对肥大细胞瘤kit免疫组化检测的了解。

 

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案例说明

病例为金毛,雌性,5 岁,未绝育。右后肢股骨处有一大小为5X4X3.5cm肿物,肿物单发生长,呈结节状活动度好。切除肿物后,用10%甲醛溶液进行固定后送博敏达临床检验实验室进行组织病理学诊断。在进行病理取材时,可见组织块质地较软,切面灰白色。经石蜡包埋后进行切片,HE和TB(甲苯胺蓝染色)染色如下图:


1.苏木素-伊红(HE)染色:



显微镜下观察HE染色结果:低背景下可见大量蓝染的细胞,散在、无规则浸润性分布;真皮层大量胶原纤维增生;高倍镜下可见大量浸润的细胞呈圆形或者椭圆形,细胞大小比较一致的煎蛋样细胞组成,部分细胞颗粒明显,部分可见双核等,细胞有轻度非典型性。


2.甲苯胺蓝(TB)染色:


显微镜观察TB 染色结果:浸润细胞形态观察高倍镜下肥大细胞质中可见特征性、典型的蓝紫色颗粒,甲苯胺蓝染色阳性。


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组织学分级

肥大细胞瘤的组织学分级对于犬来说是最一致的预后因素评估。无差别使用手术治疗犬的肿瘤,通常该犬由于局部复发或转移在6个月内死于这种疾病。对于高分化和中分化级别的肿瘤,分别有80%-90%的概率在完整切除后长期生存。

MCT的病理学分级越高,患犬存活时间越短,肿瘤转移率越高:


1)Patnaik分级:      


2)最新Kiupel分级(高级别和低级别):

高级别:在10个400倍视野内至少可见7个细胞有丝分裂相和至少3个多核细胞(3个细胞核以上)以及至少3个异常的细胞核,并有巨核细胞出现。高级别的MCT患犬具有更高的病死率和肿瘤转移率,且患犬存活时间和肿瘤转移所需时间都更短。

低级别 :肥大细胞分化良好,胞浆空间充裕充满颗粒,核染色质浓缩,轻度的细胞异型性。一些多孔的细胞核核仁明显,核仁有的呈疱状,有丝分裂的细胞数量适中。


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新免疫组化Kit标记
  • 对于低分化以及无颗粒型肥大细胞瘤等难诊断病理由较高的价值;无颗粒和低分化肥大细胞瘤很难从组织学上区分,此时免疫标记是最佳选择。


  • 在靶向治疗药物的选择,以及预后有重大意义:目前靶向药物针对kit阳性的肥大细胞瘤有效率从82%-100%不等,而对于kit阴性的肥大细胞瘤有效率仅为22.7%,由于靶向药物较为昂贵以及相应副作用,因此国际上推荐在肥大细胞瘤治疗前应建议做kit相关的免疫组化或基因检测。


  • 基本原理:根据抗原抗体相结合的原理,抗体通过脱蜡、抗原修复、封闭、抗体孵育、显色等操作进行实验。


以下是该病例kit免疫组化染色结果:



显微镜下观察免疫组化结果:在细胞膜上呈棕色染色,kit阳性。

  

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治疗
  • 外科:在我国小动物临床中,对于单发的 MCT且能达到手术要求的,通常都会采取手术切除,一般建议肿瘤边缘向外扩大2-3cm切除,切除深度应尽可能深及肌层。


  • 放疗:肥大细胞瘤几乎都是恶性的。对于局部单发且无远端转移的 MCT患犬,一般会采用手术结合放疗的治疗方法,但是由于昂贵的放疗设备和治疗费,该治疗方法目前不能被广大动物医院和宠物主人所接受。


  • 化疗:一般来说,多发性MCT患犬可联合应用手术和放疗两种治疗方式,对于患有远端转移或侵袭性很强的 MCT患犬来说,则需采取化学疗法。传统化疗药物在杀死肿瘤细胞的同时也会损伤其他分裂速度快的细胞,同时引发各种副作用如骨髓抑制和胃肠道功能紊乱等。很多药物都可以用来控制MCT,包括泼尼松龙,长春花碱和洛莫司汀,这些药物可以单独适应,也可以联合应用。另外近些年,多项研究和临床病例报告均报道了分子靶点药物对犬MCT的疗效,但是分子靶点药物并非对所有 MCT均有效,其仅对发生了c-kit基因突变的 MCT治疗有效,因此免疫组化检测可以大幅度提高分子靶点药物治疗犬MCT的有效率。


  • 本例:该肿瘤确诊为低级别肥大细胞瘤,kit阳性,在扩大切除后,应辅以小分子靶向药物治疗,如帕拉定等酪氨酸激酶抑制剂,严格规范应用靶向治疗药物,会获得较好的预后效果。

 

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总结

在诊断肥大细胞瘤时,除了细胞学、组织学,包括HE和TB(甲苯胺蓝)染色外,还需辅助以kit免疫组化诊断,这样才能获得更加精确完整的诊断结果,以及精准的治疗方案,最终达到良好的预后效果。


如今博敏达临床检验实验室已经正式开展肥大细胞瘤的kit免疫组化项目,为全国兽医师提供更加精准的诊断和治疗依据,也为患宠带来福音。


送检Tips

1.取样:切取大小合适(一般为2.0cm*1.5cm*0.3cm,肿瘤病理取样可适当大些)的典型病变组织,理想取样方式为梭形组织切块,长轴与病变边缘垂直,与表皮平行。。采样位置如毛发较长可使用剪刀剪断,但不可进行刮擦和剃毛,以免破坏表皮影像完整外观。同时以环钻或手术方式获取病变交界处组织,益于明确诊断和提示边缘是否且干净。


2.固定:组织样本离体后立即放入病理杯(10~12%福尔马林溶液),病理杯中固定(固定液一半为组织样本的5-10倍。以盖过样本为宜),旋紧瓶塞并以封口膜封包瓶口。


3.标记:样本瓶应简单标记送检部位、送检医院、宠物或宠主姓名等。


4.填写:请务必详尽填写病理送检单,标注判度要求:国内或国际,并将术前瘤体的完整照片(备注:医院名称+宠物名字)发送至path@biominda.com。如有其他问题请将其写入备注栏,以便得到更加精准的判读结果。


5.寄送:请将病理申请单与组织病理杯一齐置于样本袋中,平放于包装盒中,平洲由报纸固定,快递(推荐顺丰)至指定寄送地址,并将单号等相关信息通知我司销售或客服人员。


出结果时间:a.病理:国内,收到样本后,5个工作日;国际:收到样本后,7个工作日。b.免疫组化:收到样本后,10个工作日。


报告形式:以电子邮件形式发送

寄送地址:南京市秦淮区永丰大道8号B2栋503室

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